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消滅細胞汙染

當清晨的陽光滿照大地時,在細胞培養室的角落,倒置顯微鏡旁,總會聚集著幾個孩紙,時不時的各種感慨。啊……細胞又長滿了!咦……細胞咋飄了好多?唉……這個細胞狀態好差,能不能長起來?完了完了,細胞汙染了……

 

各種細胞,總會有各樣問題讓人猝不及防。

 

雖說細胞培養是基礎性的技術,但並不是每個人都能把每種細胞養的很好呢!

 

今天小編就來說說細胞培養室裏細胞汙染的事兒。

 

常見的細胞汙染除了來自其它細胞係的交叉汙染外,包括支原體、**、**汙染。這些微生物汙染對細胞產生的影響很大呢!例如,它們會與宿主細胞競爭營養;分泌酸性或堿性的副產物,使宿主細胞停止生長;產生對細胞直接有毒的H2O2等等。

 

有同學說,我使用了無菌的試劑和耗材,也遵循了無菌操作的要求,然而……還是莫名汙染了。隔壁的同學還沒有我做的仔細呢!

 

那麽,這種情形下,細胞到底為什麽會汙染呢?細胞汙染要怎麽辦呢?

 

小編覺得此同學和彼同學,*大的差異恐怕是操作環境了。給大家提個醒,細胞培養室的環境控製尤為重要啦。

 

有這樣一篇文獻[1],作者對比了正常細胞培養室和汙染培養室,在可能汙染的位置放了血培養皿,根據微生物的生長狀況,研究細胞汙染的原因。以下是代表性的培養結果。

 

 

 

 

 

汙染物是毋庸置疑的源頭,培養室的空氣、培養箱內循環的空氣、培養箱的層架以及顯微鏡的載物台和物鏡都可能是汙染源。

 

其實,特別容易成為汙染源的地方有這麽幾個:

 

1)空調(估計是細胞培養室沒有做層流,也不經常清洗)。

2)生物安全櫃的空氣過濾係統。

3)生物安全櫃的進風口(如下圖黃線圈出的位置,操作不慎的話,很容易把培養基或者血清之類的東西滴進這個風口,裏麵長個黴什麽的都是正常的,因為你不會及時拆開清理)。

 

 

 

 

4)顯微鏡(一般也不會有人用84擦顯微鏡吧)

 

5)培養箱的水盤和複蘇細胞用的水浴鍋(基本上是溫床,但是可以在裏麵加入硫酸銅,並且周期性更換來避免長菌,但問題是硫酸銅會損傷不鏽鋼)。

6)離心機(也是重災區)。

7)液氮罐(這個估計大家都不會注意的,但好在液氮罐汙染可能性比較低)。

 

如果出現細胞汙染的情況,勸你直接加入84,滅活以後丟棄。萬一不幸,**肆虐,細胞培養室還要用甲醛熏蒸。

 

但是,你的細胞特別珍貴,汙染了,怎麽辦?那就要用***了!

 

1)、*常用:青黴素、鏈黴素聯合抑製**,即所謂的“雙抗”,主要針對革蘭氏陽性菌、陰性菌;對於**的感染也可用慶大或卡那黴素;


2)、如果**汙染嚴重,可用兩性黴素/製黴菌素控製;


3)、若為支原體汙染,可用慶大黴素/四環素/紅黴素;

 

注意,抑製**的***,對細胞都有比較大的傷害。使用前,一般都建議先做預實驗,估計對細胞本身的影響。

本次的細胞培養就寫到這裏。關於細胞培養更多的故事,請後續關注~

 

今天,你的細胞還好麽?

 

 

 

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